এই গেমের পটভূমি বাস্তব-জগতের ঘটনাগুলির একটি কাল্পনিক ইতিহাস নিয়ে নির্মিত এবং স্বাধীন ইচ্ছায় শান্তির জন্য লড়াইকারী অ্যাসাসিন এবং টেম্পলারদের, যারা নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে শান্তি কামনা করে তাদের মধ্যে বহু শতাব্দী পুড়নো সংগ্রামকে অনুসরণ করা হয়েছে। ফ্রেমিংয়ের গল্পটি একবিংশ শতাব্দীতে সেট করা হয়েছে যেখানে ডেসমন্ড মাইলস তাঁর পূর্বপুরুষ ইজিও অডিটরে দা ফিরেনজেরবংশানুগতিক স্মৃতিগুলিকে প্রত্যক্ষ করেন। মূল আখ্যানটি পঞ্চদশ এবং ষোড়শ শতকের গোড়ার দিকে ইতালিররেনেসাঁর উৎকণ্ঠার সময়কে ঘিরে। প্লেয়াররা ইজিওকে তার পরিবারের সাথে বিশ্বাসঘাতকতার জন্য দায়ীদের বিরুদ্ধে প্রতিশোধের সন্ধানে গাইড করতে ফ্লোরেন্স, ভেনিস, তোসকানা, মন্টেরিজিওনি এবং ফোরলি অন্বেষণ করতে পারে। প্রাথমিক লক্ষ্য হলো প্লেয়ারের যুদ্ধ এবং স্টিলথ ক্ষমতাগুলি ব্যবহার করা, যেহেতু ডেসমন্ড অ্যাসাসিন এবং টেম্পলারদের মধ্যে দ্বন্দ্বের অবসানের আশায় প্রথম সভ্যতা হিসাবে পরিচিত একটি প্রাচীন জাতির রহস্যগুলি উদ্ঘাটন করতে শুরু করে।
