Northern blot

Schéma průběhu nothern blotu od získání vzorku po označení hledaných RNA segmentů.

Northern blot je laboratorní postup sloužící k nalezení, měření délky a množství RNA transkriptů zájmového genu ve směsi různých RNA molekul.[1][2] Využívá se ke zjišťování míry exprese jednotlivých genů u organismů, jejich tkání či samotných buněk. To umožňuje například identifikaci genů zodpovědných za některá onemocnění či detailní výzkum průběhu embryonálního vývoje živočichů.[3] Jméno získal díky své podobnosti s technikou Southern blot (pojmenovaná podle jejího vynálezce profesora Edwina Southerna).[1]

Postup

[editovat | editovat zdroj]

Nejprve se vzorek RNA denaturuje a rozdělí podle délky za pomocí nanesení na agarózový gel, kde proběhne tzv. gelová elektroforéza. Poté je přenesen na nylonovou membránu a na ní zafixován. (Podle tohoto kroku je technika pojmenovaná blot nebo blotting. Jde o anglický termín užívaný pro vysoušení povrchu za pomoci absorpčního materiálu.) Za využití označené próby se dále provádí hybridizace s RNA, tzn. nanesení komplementární DNA nebo RNA k hledané sekvenci. Na pevné membráně tak dojde k vazbě hledaných kusů RNA s komplementární próbou, která je poté obvykle dobře detekovatelná díky svému označení radioaktivními atomy nebo fluorescenčním barvivem. Pak je již možné vyhodnotit přítomnost hledaných segmentů RNA.[2][4]

Později byla objevena i technika takzvaného reverzního nothern blotu, který umožňuje za pomoci RNA próby označit hledané segmenty DNA.[1]

Reference

[editovat | editovat zdroj]
  1. ↑ a b c KLIONSKY, Daniel J. Blame it on Southern, but it's a western blot. Autophagy. 2016-11-28, roč. 13, čís. 1, s. 1–2. PMID: 27893304 PMCID: PMC5240824. Dostupné online [cit. 2018-09-10]. ISSN 1554-8627. DOI 10.1080/15548627.2016.1255382. PMID 27893304. 
  2. ↑ a b Northern blot | Learn Science at Scitable. www.nature.com [online]. [cit. 2018-09-10]. Dostupné online. (anglicky) 
  3. ↑ Southern, Northern, Western, and Eastern blots. AAAS - The World's Largest General Scientific Society. 2016-06-10. Dostupné online [cit. 2018-09-10]. (anglicky) 
  4. ↑ HE, Shan L. Northern blot. Methods in enzymology. 2013, roč. 530, s. 75–87. PMID: 24034315 PMCID: PMC4287216. Dostupné online [cit. 2018-09-10]. ISSN 0076-6879. DOI 10.1016/B978-0-12-420037-1.00003-8. PMID 24034315. 

Externí odkazy

[editovat | editovat zdroj]