Mary Lynn Rajskubs Mutter Betty ist Apothekenhelferin und ihr Vater Tony Schlosser.[1] Sie hat zwei ältere Schwestern.[2] Rajskub machte 1989 ihren Abschluss an der Trenton High School in Trenton. Anschließend studierte sie in Detroit und später in San Francisco an der Kunstakademie. Dabei entdeckte sie ihr komödiantisches Talent und begann eine Karriere im Fernsehen.
Zu Beginn trat sie in einigen Comedy-Shows wie Mr. Show with Bob and David und Die Larry Sanders Show im US-Fernsehen auf. Zudem war sie in kleineren Rollen in verschiedenen Komödien auch im Kino zu sehen, darunter Road Trip, Punch-Drunk Love und Sweet Home Alabama.
Ihr Durchbruch kam 2003 mit einer ernsteren Rolle in der Echtzeit-Fernsehserie 24. Darin ist sie als ComputerexpertinChloe O’Brian zu sehen. Während sie in der dritten Staffel noch eine kleinere Rolle hatte, gehört sie ab der vierten Staffel zu den Hauptdarstellern von 24. Daneben hatte sie auch Gastauftritte in anderen Fernsehserien wie King of Queens und Gilmore Girls. Im Jahr 2006 spielte sie in dem Kinofilm Firewall neben Harrison Ford und Paul Bettany. Für die Fortsetzung zu 24, 24: Live Another Day nahm sie 2014 ihre Rolle als Chloe O’Brian wieder auf.[3] 2021 war sie in dem Science-Fiction-FilmThe Tomorrow War zu sehen, der bei Prime Video veröffentlicht wurde.
Mary Lynn Rajskub malt und spielt Gitarre. Sie tritt als Stand-Up-Comedian auf und war eine Hälfte des Comedy-Duos Girls Guitar Club.
Seit 2007 war sie mit dem Personaltrainer Matthew Rolph zusammen. Am 24. Juli 2008 kam das gemeinsame Kind zur Welt. Am 1. August 2009 heiratete sie Rolph in Las Vegas. Seit 2019 sind sie geschieden.[4]