La serie segue le esilaranti avventure nella stanza dei giochi dei giovani Kermit la Rana, Miss Piggy, Fozzie, Gonzo, Animal e la pinguina Summer, un nuovo membro dei Muppet Babies. Come sempre, la Signorina Tata incoraggia dolcemente e allegramente i Muppet Babies a usare la loro immaginazione per esplorare gli angoli più remoti dell'universo.
Kermit - Un ranocchio che ama l'avventura. Doppiato in originale da Matt Danner e in italiano da Mino Caprio.
Piggy - Una femmina di maiale che si considera una star e ha una cotta per Kermit. Doppiata in originale da Melanie Harrison e in italiano da Alessandro Quarta.
Summer - Una femmina di pinguino viola del Polo Sud che ama l'arte. Doppiata in originale da Jessica DiCicco e in italiano da Monica Volpe.
Signorina Tata - Il custode dei Muppet Babies. Ha vinto una medaglia d'oro in una disciplina di ginnastica allo Sport-A-Thon. In un episodio della stagione 2,era sostituita da un suo amico,il Signor Tato (doppiato in originale da Dulé Hill) Doppiata in originale da Jenny Slate e in italiano da Sara Ferranti.
Camilla - Una pulcina bianca e la migliore amica di Gonzo, coinvolta nelle attività dei Muppet Babies. Ha due compagne: Priscilla (doppiata da Dee Bradley Baker) e Bip-Bip. Doppiata in originale da Melanie Harrison e in italiano da Barbara Sacchelli.
Sig. Statler e Sig. Waldorf - I vicini della Signorina Tata che spesso commentano le attività dei Muppet Babies dal balcone della loro casa. Doppiati rispettivamente in originale da Eric Bauza e Matt Danner e in italiano da Franco Zucca e Emidio La Vella.
Rizzo il Ratto - Un topo che vive nella tana dei topi nella stanza dei giochi dei Muppet Babies. Doppiato in originale da Ben Diskin e in italiano da Luigi Ferraro.
Beaker - l'assistente di Bunsen Honeydew. Doppiato in originale da Matt Danner e in italiano da Ivan Andreani.
Dr. Denti - Il membro principale della band Electric Mayhem. È apparso nella trasmissione live-action "Muppet Rock" dove ha visto Animal suonare nel backstage ed è interessato a farlo entrare nell'Electric Mayhem. Animal rifiuta per il momento perché ha bisogno di continuare a fare pratica. Interpretato da Bill Barretta e doppiato in italiano da Goffredo Matassi.
Rowlf - Un cane che è un aspirante pianista. Doppiato in originale da Matt Danner e in italiano da Pierluigi Astore.
Sweetums - Un orco che è il vicino di casa dei Muppet Babies. Doppiato in originale da Dee Bradley Baker e in italiano da Mario Bombardieri.
Cuoco Svedese - Uno chef che è un finto prodigio di lingua svedese. Doppiato in originale da Matt Danner e in italiano da Gianluca Solombrino.
Robin - Un girino che è nipotino di Kermit. Doppiato in originale da Eric Bauza e in italiano da Fabrizio Manfredi.
Scooter - Un giovane ragazzo che indossa una giachetta gialla e verde. Doppiato in originale da Ogie Banks.
Skeeter - La sorella gemella atletica di Scooter. Doppiata in originale da Cree Summer.
Sam l'aquila - Un aquilotto. Doppiato in originale da Eric Bauza.
Jill - Una rana che vive nell'altra parte del asilo. Doppiata in originale da Ashley Spillers.
Carlos - Una rana blu che appare per la prima volta in "La rana è sempre quella". Doppiato in originale da Todrick Hall e in italiano da Gianluca Muziu.
Rozzie - Una koala che è la sorella adottiva di Fozzie. Doppiata in originale da Charlie Townsend e in italiano da Veronica Cuscusa.